
酵母双杂交技术主要应用于验证蛋白与蛋白之间是否互作,既可以在酵母体内检测两个已知的蛋白之间是否互作,也可以通过酵母文库的构建,从文库中筛选出与己知蛋白互作的未知蛋白,极大的助力于功能基因的研究。本系统也适用于研究蛋白自激活实验。(酵母双杂交技术可用于已知蛋白间的互作验证,亦可用于未知蛋白的筛选和鉴定)
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酵母双杂交技术是以酵母的遗传系统为基础,重建具有转录活性和DNA结合结构域,研究蛋白与蛋白之间相互作用的一种实验技术。该系统由DNA结合结构域(Binding Domain,BD)和转录激活结构域(Activation Domain、AD)两个相对独立的功能结构域组成。其中,BD和AD分别是GAL4蛋白上不同的两个结构域(1-147aa和768-881aa)。在利用GAL4系统研究蛋白相互作用时,BD与诱饵蛋白(Bait)融合,AD与靶蛋白即要捕获的蛋白(prey)融合,一般情况下单独的BD可以与Ga14基因上游活化序列(GAL UAS)结合但不能引起转录,单独的AD不能与GAL UAS结合更不会引起转录,只有当BD-Bait和AD-prey两个融合蛋白,在空间上相互靠近且相互结合时才能够与GAL UAS结合并激活下游报告基因转录。

客户提交实验材料详细信息(候选蛋白序列、顺式调控元件DNA序列等)—客户提交信息确认—构建诱饵菌株以及候选蛋白表达载体—诱饵菌株自激活检测及酵母转化—互作筛选及稀释点种验证—数据采集及处理并撰写提交实验报告

(1)提供元件与报告基因和候选蛋白与AD融合的酵母表达载体序列信息;
(2)筛选培养后的图片采集和处理信息;
(3)详细的酵母单杂交实验步骤。