
酵母单杂交技术应用于验证转录因子与基因上游顺式作用元件是否有作用关系;也可以通过已知的基因上游的顺式作用元件,通过酵母单杂交文库筛选目标基因上游的反式作用因子,助力于功能基因的研究。


酵母单杂交技术是研究蛋白与DNA相互作用的一种分子生物学实验技术。以酵母的遗传为背景,研究真核生物反式作用因子与DNA互作的一种实验技术。该技术是Prey蛋白与GAL4的激活结构域 (AD)融合,把特定的目的基因顺式作用元件与基本启动子或微小启动子(mini promoter,Pmin)连接,与下游报告基因结合;当Prey蛋白与目的基因顺式作用元件结合时,激活Pmin转录,并启动报告基因表达。根据报告基因的表达情况,就可以反应反式作用因子与基因上游顺式作用元件是否有作用关系。

客户提交实验材料详细信息(候选蛋白序列、顺式调控元件DNA序列等)—客户提交信息确认—构建诱饵菌株以及候选蛋白表达载体—诱饵菌株自激活检测及酵母转化—互作筛选及稀释点种验证—数据采集及处理并撰写提交实验报告。

(1)提供元件与报告基因和候选蛋白与AD融合的酵母表达载体序列信息;
(2)筛选培养后的图片采集和处理信息;
(3)详细的酵母单杂交实验步骤。