Pull-Down是体外验证蛋白与蛋白互作关系的分子生物学实验技术之一。该技术主要原理是将GST融合蛋白作为诱饵蛋白,其可与固定在固相支持物上的GSH(谷胱甘肽)结合,与蛋白样品或细胞/组织裂解液共孵育,即可捕获样品中与诱饵蛋白互作的蛋白。接着通过洗涤或洗脱过程去除其余物质,并将捕获的蛋白回收,进行WB或质谱等检测分析,从而证实两种蛋白间的互作关系或纯化出相应的目的蛋白。

Pull-Down技术可以通过体外分析出蛋白与蛋白之间的互作关系;可以与酵母双杂交以及BiFC结果相互验证;亦可用于未知蛋白的鉴定。
客户提交实验详细信息(验证蛋自的ORF序列,蛋白结构等)—对客户提交信息和材料的确认—构建候选蛋白加标签的原核表达载体—收集和纯化候选蛋白—混合和分离候选蛋白—Western Blot检测—撰写提交实验报告。
(1)提供目标蛋白原核表达载体序列信息;
(2)蛋白的收集和纯化详细实验步骤;
(3)候选蛋白混合与分离的详细实验步骤;
(4)Western Blot检测结果。