
通过CRISPR/Cas系统(sgRNA引导Cas蛋白)在基因组特定位置制造DSB,依赖同源定向修复(HDR)机制,以目标片段的供体DNA为模板完成大片段替换。该技术可实现3Kb以上片段的精准插入或替换。


(1)功能基因研究:利用大片段定点插入技术可插入一些标签蛋白(如6×HIS、Flag、GST、Myc等)进行功能基因机理研究;亦可用于功能基因UTR区域的原位插入;
(2)作物新性状创制:传统基于农杆菌的转基因方式插入位置随机且不精准,使得转基因性状转化体筛选过程繁杂冗长,利用大片段定点插入技术可使外源基因插入到基因组安全港(Genomic safe harbor, GSH)区域,高效快速的进行新性状的创制。

(1)自主开发通过CRISPR/Cas系统与DNA修复相关功能基因、位点特异性重组酶相结合,完成基因组DNA片段的定向插入,定向删除、同源定向修复以及等位基因替换等事件;
(2)具有稳定、高效的植物遗传转化体系,可快速获得片段插入或删除植株。

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